| [ sciEncE ] in KIDS 글 쓴 이(By): monocell (단세포) 날 짜 (Date): 2001년 12월 7일 금요일 오후 05시 20분 22초 제 목(Title): Re: [Q] enzyme assay? 위에 답변주신 분들 감사합니다. 사실 저는 이쪽은 잘 모르거든요. 제가 하고싶은 일은 PKC inhibitor library를 만드는 건데(전 화학전공) 만드는 건 조합화학적 방법으로 기하급수적으로 많은 수를 만들 수 있지만 분석하는건 하나씩 한다고 해서(물론 HTS한다고는 하지만..) 뭔가 아이디어가 없을까 생각해보던 중이었고요. 찾아보니 두개의 flourescence tag을 이용해서 한 효소의 두개의 binding domain을 동시에 관찰한 예가 있더라구요. 근데,PKC가 isoform이 여럿 있어서 각각의 inhibitor의 inhibition profile이 중요하다고 하는데(각 isoform에 대한 inhibition pattern) 이 inhibition assay결과가 측정 조건에 민감한지 페이퍼마다 다른 것 같더라구요. 특히 다른 isoform간의 측정 결과는 직접 비교하기에는 reliable하지 않다는 글을 읽었었거든요. 그래서 여러 isoform을 동시에 assay하면 그런 실험 조건의 차이를 최소화해서 서로 비교 가능한 inhibition profile을 얻을 수도 있겠다 싶었죠. 근데, 아까 과 친구랑 이야기하다 보니 그친구왈 flourescence tag이 여러가지가 있으면 파장대가 겹쳐서 관측이 힘들어지는 문제도 있지만, 자기들끼리 energe transfer가 일어나서 아예 형광이 죽어버리는 경우도 있을수 있다고 하더군요. (갈수록 태산..-_-) 그리고, PKC는 아직 isoenzyme-selective한 substrate는 거의 없다고 하는데 RACK(receptor for activated c-kinase)란 녀석은 활성화된 kinase랑 isoform-specific하게 붙는다고 하네요. (얘는 substrate는 아니고, anchor입니다.) 그래서 얘네들한테 tag을 붙여서 fluorescence polarization을 하면 특정 isoform이 얼마나 활성화되었는지를 알 수 있을 듯도 싶어요. 이 아이디어는 어떻게들 생각하시는지요? 실현 가능성이 있을까요? 그리고 거기에서 얻는 정보가 얼마나 유용할지 잘 모르겠네요. 이왕이면 좀 쉽게 답해주시면 더 감사하겟습니다. 학부때 생화학 두학기 들은게(벌써 4년전..-_-) 이쪽 지식의 전부라.. 위에 hshim님 답변은 솔직히 무슨말인지 모르겠더라구요. 9에구.. 무식이 자랑도 아닌데..) |